ELISA 实验各类组织匀浆处理

ELISA 实验各类组织匀浆处理

ELISA（酶联免疫吸附测定）实验中，组织匀浆的处理是关键步骤之一。本文详细介绍了各类组织匀浆（特别是不易匀浆的组织）的采集、处理和保存方法，包括手工匀浆、机器匀浆和超声粉碎等多种方式，并提供了具体的实验参数和保存条件建议。

ELISA 实验各类组织匀浆处理

组织采集与预处理

1. 采集组织：在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，称重，剔除附属的结缔组织，称取组织块。

2. 准备匀浆介质：用移液管量取 0.1M PBS 或者用 0.86％冷生理盐水，匀浆介质或生理盐水的体积总量应该是组织块重量的 9 倍。用眼科小剪尽快剪碎组织块（天然时操作要在冰水浴中进行，将盛有组织 的小烧杯放入冰水中）。

匀浆方式

3. 匀浆的方式有多种：

• a) 手工匀浆：将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中，再将剩余的 1/3 匀浆介质或生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块，一起倒入匀浆管中进行匀浆，左手持匀浆管将下 端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数十次（6～8 分钟），充分研碎，使组织匀浆化。

• b) 机器匀浆：用组织捣碎机 10000～15000r/min 上下研磨制成 10％组织匀浆，也可用内切式组织匀浆机制备（匀浆时间 10 秒/次，间隙 30 秒，连续 3～5 次，在冰水中进行），皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间。

• c) 超声粉碎：用超声粉碎机进行粉碎，可用 Soniprep150 型超声波发生器以振幅 14 微米超声处理 30 秒使细胞破碎，也可用国产超声波发生仪，用 40 安培，5 秒/次，间隙 10 秒反复 3～5 次。

匀浆后处理与保存

4. 离心处理：将制备好的 10％匀浆用离心机 4℃，3000rpm 离心 15min，将离心好的匀浆留上清，弃下面沉淀。

5. 分装保存：取上清。 分装冻存备用，

• 2-8℃下，可放置保存 24-48 小时；
• -20℃下，可放置保存 1 个月；
• -70℃下，可放置保存 6 个月；

6. ELISA 测定：根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种 ELISA 测定。