革兰氏染色法的基本原理

革兰氏染色法的基本原理

革兰氏染色法是微生物学中一种重要的细菌分类方法，通过特定的染色步骤和试剂，可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类。这种染色方法不仅在细菌分类学中具有重要地位，也是临床诊断和研究中的常用技术。

革兰氏染色原理

通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物。革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。

革兰氏染色步骤

革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法：

1. 涂片固定。
2. 草酸铵结晶紫染1分钟。
3. 自来水冲洗。
4. 加碘液覆盖涂面染约1分钟。
5. 水洗，用吸水纸吸去水分。
6. 加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。
7. 蕃红复染液（稀）染2分钟后，自来水冲洗。干燥，镜检。

所需溶液

革兰氏染色需用四种不同的溶液：

• 碱性染料初染液：用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫。
• 媒染剂：增加染料和细胞之间的亲和性或附着力，常用的媒染剂是碘。
• 脱色剂：将被染色的细胞进行脱色，常用的脱色剂是95%的酒精。
• 复染液：也是一种碱性染料，其颜色不同于初染液，常用的复染液是番红。