免疫印迹法的免疫反应与注意事项

免疫印迹法的免疫反应与注意事项

免疫印迹法（Western Blot）是检测蛋白质特性、表达与分布的一种最常用的方法，广泛应用于组织抗原的定性定量检测、多肽分子的质量测定及病毒的抗体或抗原检测等领域。本文将详细介绍免疫印迹法的具体操作步骤和关键注意事项，帮助研究人员更好地掌握这一重要技术。

免疫反应步骤

1. 用0.01M PBS洗膜，5min ×3次。
2. 加入包被液，平稳摇动，室温2hr。
3. 弃包被液，用0.01M PBS洗膜，5min×3次。
4. 加入一抗（按合适稀释比例用0.01M PBS稀释，液体必须覆盖膜的全部），4℃ 放置12hr以上。阴性对照，以1%BSA取代一抗，其余步骤与实验组相同。
5. 弃一抗和1%BSA，用0.01M PBS分别洗膜，5min×4次。
6. 加入辣根过氧化物酶偶联的二抗（按合适稀释比例用0.01M PBS稀释），平稳摇动，室温2hr。
7. 弃二抗，用0.01M PBS洗膜，5min×4次。
8. 加入显色液，避光显色至出现条带时放入双蒸水中终止反应。

注意事项

1. 一抗、二抗的稀释度、作用时间和温度对不同的蛋白要经过预实验确定最佳条件。
2. 显色液必须新鲜配置使用，最后加入H2O2。
3. DAB有致癌的潜在可能，操作时要小心仔细。

文章来源： 新浪医药