HPLC色谱柱污染后的再生方法

HPLC色谱柱污染后的再生方法

色谱柱作为高效液相色谱（HPLC）系统的核心部件，在长期使用过程中容易受到各种污染，导致柱效下降、峰型变差等问题。为了延长色谱柱的使用寿命并保持其分离性能，定期的清洗和再生是必不可少的。本文将介绍几种常见的色谱柱污染类型及其相应的清洗方法。

在清洗色谱柱时，一般每种溶剂使用20倍以上柱体积去冲洗色谱柱，首先需确保色谱柱内没有缓冲液，且清洗前色谱柱中的残留溶剂应与后一种清洗溶剂互溶。

下面是不同种类填料色谱柱的常规冲洗方法：

反相色谱柱污染的清洗方法

1. 盐析污染：使用95%水乙腈以小流速冲洗，直至柱压下降。

2. 非极性化合物强吸附：在柱内无盐的情况下，先用乙醇冲洗，再用二氯甲烷冲洗，基本能洗掉非极性化合物。

3. 残留蛋白：

• 先用95%水乙腈过渡，然后用0.1%三氟乙酸（TFA）水溶液梯度洗脱至0.1%TFA（乙腈/异丙醇1：2）。
• 如果是耐碱的色谱柱，可以在上述步骤的基础上，再用95%水乙腈过渡后，用5M尿素或5M硫氰酸胍（pH7）清洗。

4. 金属离子残留：使用0.05M EDTA溶液清洗。

5. 离子对试剂污染：先用95%水乙腈过渡，再用95%乙腈水冲洗。但需要注意的是，离子对试剂污染后很难完全冲洗干净。

离子交换或尺寸排阻色谱柱污染的清洗方法

对于离子交换或尺寸排阻（SEC）色谱柱中的蛋白残留，可以使用5M尿素或5M硫氰酸胍（pH7）进行清洗。

清洗注意事项

1. 冲洗前后的置换溶剂要互溶，以避免产生沉淀或相分离。
2. 冲洗色谱柱时不要连接检测器，以免污染检测器。

通过上述方法，可以有效地对污染的色谱柱进行清洗和再生，恢复其分离性能，延长使用寿命。