单核-巨噬细胞系培养指南：Raw264.7、THP1、MH-S、J774A.1

单核-巨噬细胞系培养指南：Raw264.7、THP1、MH-S、J774A.1

细胞培养是生命科学研究中的重要技术，其中单核-巨噬细胞系在免疫学、肿瘤学等多个领域有着广泛的应用。本文详细介绍了四种常见的单核-巨噬细胞系：Raw264.7、THP1、MH-S和J774A.1，包括它们的名称、别称、简介、种属、组织来源、生长特性、应用、细胞形态、培养条件、换液频率、传代周期、传代比例、冻存液配方和注意事项等内容。

Raw264.7

基本信息

• 名称：Raw264.7（小鼠单核巨噬细胞白血病细胞）
• 别称：RAW264、RAW2647、RAW264.7、RAW-264.7、Raw 264.7、Raw264.7
• 简介：RAW264.7是在雄性BAB/14小鼠腹腔注射Abelson小鼠白血病病毒A-MuLV而诱发肿瘤的腹水中建立，是最常见的炎症细胞模型之一。
• 种属：小鼠
• 组织来源：腹水
• 生长特性：半贴壁
• 应用：免疫学研究；巨噬细胞功能和生物学特性；破骨细胞生成体外模型；药物筛选和毒理学研究；吞噬分子机制；炎症研究；抗原递呈机制。
• 细胞形态：单核/巨噬细胞

培养条件

• 完全培养基配方：DMEM高糖＋10%FBS+1%双抗
• 温度：37°C
• CO2：5%CO2

维护与传代

• 换液频率：2-3次/周
• 传代周期：当细胞密度达到80%时，及时进行传代
• 传代比例：1:3-1:6
• 冻存液配方：95%完全培养基+5%DMSO或商品化细胞冻存液

注意事项

• RAW264.7比较容易分化，当细胞密度达到80%时一定要及时传代，传代时不要使用胰酶消化，胰酶会更加刺激它分化加剧；分化后的细胞贴壁牢固，在传代过程中要注意尽量避免强制或暴力吹打，只保留较易吹下的未分化细胞去传代即可；
• 更换血清批次可能会影响细胞生长特性，尤其是对于RAW264.7这种具有聚团生长特性、且易分化的细胞，因此建议尽量减少外源性干扰因素，使用同一批次的血清以保持实验的一致性；
• 在细胞密度较大时，RAW264.7细胞可能会轻微脱落变圆或者许多细胞堆积在一起，有些细胞甚至脱落漂浮。这些漂浮的细胞是存活的，在传代时应收集起来，离心后细胞沉淀可以继续培养；
• 如果RAW264.7细胞不贴壁，可以尝试将细胞离心收集后，用1 mL培养基重悬，然后轻轻吹打直至细胞被吹成单细胞，以便重新铺板。RAW264.7细胞脱落后倾向于抱团，需要将聚成团的细胞吹散成单细胞，否则细胞很难重新贴壁。
• RAW264.7细胞在培养过程中会经历形态变化，从长方体形态和有“伪足”延伸转变为圆形，并可能以叠加的形式生长，这是正常现象；

THP1

基本信息

• 名称：THP-1（人单核细胞白血病细胞）
• 别称：THP1、Tohoku Hospital Pediatrics-1
• 简介：THP-1是从急性单核细胞白血病患者外周血中分离出来的单核细胞。
• 种属：人
• 组织来源：外周血
• 生长特性：悬浮细胞
• 应用：三维细胞培养；免疫系统紊乱研究；免疫学；免疫肿瘤学；毒理学；细胞和基因治疗（CGT）开发。
• 细胞形态：单核细胞

图片来源于JCRB

培养条件

• 完全培养基配方：RPMI-1640＋10%FBS＋0.05mM β-巯基乙醇＋1%双抗
• 温度：37°C
• CO2：5%CO2

维护与传代

• 换液频率：2-3次/周，可通过补充新鲜培养基（半量换液）或者离心换液两种方式进行换液
• 传代周期：当细胞密度达到810^5/mL可进行传代，不要让细胞浓度超过1.510^6 /mL
• 传代比例：95%完全培养基+5%DMSO或商品化细胞冻存液

注意事项

• THP-1半量换液2-3次后可通过离心换液去除细胞代谢产物并保证完全培养基新鲜且营养充足；
• THP-1适合偏酸环境，当培养基呈橘色时可不用换液；
• THP-1细胞在密度较稀时，有少量细胞聚团属于正常现象，不建议将聚团的细胞吹散，等待密度高时，细胞会自然分散开；
• THP-1细胞培养过程中出现少量细胞贴壁属于正常情况，不需要担心。可以轻吹收集细胞或者丢弃贴壁部分细胞。但如果当贴壁细胞比例高于20%，说明细胞生长环境有异常，这时候就需要排查培养箱温度及CO2浓度、培养基成分，以及培养器皿是否异常。

MH-S

基本信息

• 名称：MH-S（小鼠肺泡巨噬细胞）
• 别称：MHS
• 简介：MH-S细胞系是通过SV40转化富含贴壁细胞的7周龄雄性BALB/c小鼠肺泡巨噬细胞群体而获得的。这些细胞保留了肺泡巨噬细胞的许多特性，包括典型的巨噬细胞形态，具有吞噬性、酯酶阳性和过氧化物酶阴性。
• 种属：小鼠
• 组织来源：肺泡
• 生长特性：半贴壁半悬浮
• 应用：免疫学；吞噬作用研究；斑块测定。
• 细胞形态：巨噬细胞样

图片来源于ATCC

培养条件

• 完全培养基配方：RPMI-1640+10%FBS+0.05mM β-巯基乙醇+1%双抗
• 温度：37°C
• CO2：5%CO2

维护与传代

• 换液频率：2-3次/周，可通过补充新鲜培养基（半量换液）或者离心换液两种方式进行换液
• 传代周期：当细胞密度达到70%-90%时进行传代
• 传代比例：1:2-1:3
• 冻存液配方：90%FBS+5%DMSO或商品化细胞冻存液

注意事项

• MH-S细胞为半贴壁生长，传代时需同时收集悬浮和贴壁细胞。首次传代建议使用T25培养瓶进行1:2比例传代；
• 培养时瓶子竖立放置（瓶盖朝上），可增加细胞局部密度，促进细胞增殖；
• MH-S半量换液2-3次后可通过离心换液去除细胞代谢产物并保证完全培养基新鲜且营养充足；
• MH-S细胞少量聚团，呈葡萄串状，属于正常现象，特别是细胞密度较低时，易出现这种情况，更换血清品牌或增大血清比例（不超过20%）有助于解决聚团问题。不建议将聚团的细胞吹散，等待密度高时，细胞会自然分散开。

J774A.1

基本信息

• 名称：J774A.1小鼠单核巨噬细胞
• 别称：J-774A.1、J774.A1、J774 A1、J774A.1、J 774A.1、J774 A.1
• 简介：774A.1细胞于1968年从成年雌性BABL/cN小鼠腹水中分离，源自网状细胞肉瘤。该细胞具有抗体依赖的吞噬作用，生长受硫酸葡聚糖、PPD和LPS抑制，并能分泌IL-1β和溶菌酶，是研究巨噬细胞功能及免疫调控的经典模型。
• 种属：小鼠
• 组织来源：腹水
• 生长特性：多数贴壁，少量悬浮
• 应用：免疫学研究；肿瘤微环境模拟；感染与免疫应答；药物筛选。
• 细胞形态：单核/巨噬细胞样

图片来源于ATCC

培养条件

• 完全培养基配方：DMEM高糖+10%FBS+1%双抗
• 温度：37°C
• CO2：5%CO2

维护与传代

• 换液频率：2-3次/周
• 传代周期：细胞密度达70%-90%时传代，避免过度生长导致分化
• 传代比例：1:2-1:4（首次传代建议1:2）
• 冻存液配方：90%FBS+10%DMSO或商品化细胞冻存液

注意事项

• 避免使用胰酶，胰酶会刺激分化；
• 传代间隔不超过3天以防自发分化；
• 培养时存在少量分化细胞，属于正常现象。

参考资料：ATCC官网