CAPS缓冲液配置避坑指南：99%实验人忽略的pH校准细节

CAPS缓冲液配置避坑指南：99%实验人忽略的pH校准细节

引用

网易

1.

https://www.163.com/dy/article/JQCHM9JS05565FEZ.html

在生物化学和分子生物学实验中，CAPS（3-（环己胺）-1-丙磺酸）缓冲液因其独特的性质而广泛应用于蛋白质电泳、蛋白质纯化等多个领域。然而，在配置CAPS缓冲液的过程中，pH校准细节往往被忽视，这可能导致实验结果的偏差甚至失败，因此pH校准是配制缓冲剂中不可忽视的步骤。

pH校准为何至关重要？

pH值是衡量溶液酸碱度的重要指标，在生物化学实验中具有举足轻重的地位。对于CAPS缓冲液而言，其pH值直接影响蛋白质的稳定性、电泳分离效果以及生物分子的活性。因此，校准pH值是确保实验成功的基础。然而，许多实验人员在配置CAPS缓冲液时，往往忽略了这一关键步骤，导致实验结果的不准确。

pH计校准的必备步骤

在进行pH计校准前，需确保pH计状态良好，电极干净无破损且在有效期内，并准备好pH4.00、pH7.00和pH10.00的标准缓冲溶液。校准可选择单点或多点方式，前者适用于精度要求不高的实验，后者能确保pH计在整个pH范围内准确。此外，还需进行温度补偿与校正，以消除温度对测量结果的影响，并在实验过程中精确控制温度，保证CAPS缓冲溶液pH值的准确性。

CAPS缓冲液配置中的pH校准实践

配置步骤简述

CAPS缓冲液的配置通常包括以下几个步骤：准确称量CAPS原料、将CAPS溶解在去离子水中、用氢氧化钠调节溶液的pH值至所需范围（如11.0）、定容至所需体积并贮存于适当温度（如4°C）。在这个过程中，pH值的调节是至关重要的环节。

pH调节的注意事项

在调节CAPS缓冲液pH值时，需要注意以下几点：

1. 避免局部浓度过高：将CAPS原料缓慢加入去离子水中，边加边搅拌，避免局部浓度过高导致沉淀。
2. 准确使用氢氧化钠：使用准确浓度的氢氧化钠溶液（如2mol/L NaOH）逐步调节pH值至所需范围。调节过程中应不断搅拌溶液，确保pH值均匀分布。
3. 实时监测pH值：在调节pH值的过程中，应使用pH计实时监测溶液的pH值。当接近目标值时，应减小氢氧化钠的加入量，并仔细观察pH值的变化。

pH校准的实践细节

在配置CAPS缓冲液后，还需要进行pH值的校准验证。将pH计的电极浸入配置好的CAPS缓冲液中，等待数分钟让pH计稳定。然后比较pH计显示的pH值与预期值是否相符。如果相差较大，则需要重新调节溶液的pH值或进行pH计的校准。