葡萄糖含量检测试剂盒实验解决方案

葡萄糖含量检测试剂盒实验解决方案

葡萄糖（C6H12O6,FW:180.16）是一种主要的生物燃料源，用于产生通用的能量分子ATP。由于葡萄糖在代谢中的重要性，葡萄糖水平是许多代谢紊乱的关键诊断参数。CheKine™葡萄糖检测试剂盒（微量法）可检测血清、血浆、尿液、其他体液、食物、生长培养基等，其原理是改进的邻甲苯胺法，利用与葡萄糖的特定颜色反应，630nm处的吸光度与样品中的葡萄糖浓度成正比。

试剂准备

• o-Toluidine Reagent: 即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。注意：o-Toluidine Reagent有毒性，实验时请佩戴口罩手套等防护措施。
• Glucose Standard(300mg/dL): 即用型；使用前，平衡到室温；-20℃保存。

Standard设置：

按下表所示，用去离子水将Glucose Standard 300mg/dL稀释为300、200、100、50、20、10、4mg/dL的标准溶液。

注意：每次实验，请使用新配制的标准品；配制好的标准品需要在4h之内使用。

样本制备

• 动物组织：称取约0.1g样本，加入1mL PBS，冰浴匀浆，12,000g，4℃离心5min，取上清液，置冰上待测。
• 植物组织：称取约0.1g样本，加入1mL PBS捣碎，冰浴超声波破碎5min（功率20％或200W，超声3s，间隔7s，重复30次），12,000g，4℃离心5min，取上清液，置冰上待测。
• 细胞或细菌：收集500万细胞或细菌到离心管内，用冷PBS清洗细胞，离心后弃上清，加入1mL PBS，冰浴超声波破碎细胞或细菌5min（功率20%或200W，超声3s，间隔7s，重复30次），然后12,000g，4℃离心5min，取上清液，置冰上待测。
• 血浆，血清和尿液（和其他生物液体）：直接检测。

实验步骤

1. 酶标仪或可见光分光光度计预热30min以上，调节波长到630nm，可见光分光光度计用去离子水调零。
2. 操作表（下述操作在EP管中操作）：

3. 混匀，在沸水浴中加热8min，冷水浴（4℃）中冷却4min。
4. 取200µL到96孔板或微量玻璃玻璃比色皿，检测630nm处吸光值。空白孔记为A空，标准孔记为A标、测定孔记为A测。
5. 计算ΔA测=A测-A空，ΔA标=A标-A空。注意：空白孔只需测定1次。

结果计算

注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。

标准曲线的绘制

以标准溶液浓度为y轴，ΔA标为x轴，绘制标准曲线。

Glucose浓度的计算

将样本的ΔA测代入方程得到y值（mg/dL）。

• 按样本鲜重计算
  Glucose含量(mg/g鲜重)=y÷100×V样÷(W×V样÷V样总)×n=y÷100÷W×n
• 按样本体积计算
  Glucose含量(mg/dL)=y×V样÷V样×n=y×n
• 按细胞或细菌数量计算
  Glucose含量(mg/104)=y÷100×V样÷(500×V样÷V样总)×n=y÷50,000×n

其中：

• V样：加入样本体积，0.025mL；
• 100：1dL=100mL；
• W：样本质量，g；
• V样总：加入PBS体积，1mL；
• n：样本稀释倍数；
• 500：细胞或细菌总数，500万。

换算：

• 1mg/dL葡萄糖等于55.5µM，0.001%或10ppm。
• 典型的血清/血浆葡萄糖值：70-110mg/dL。

结果展示

典型标准曲线

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