细胞共培养的方法和注意事项

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@小白创作中心

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来源

https://www.bio-review.com/co-culture/

细胞共培养（co-culture）技术是生物医学研究中的重要工具，它能够模拟体内细胞的微环境，帮助研究者深入了解细胞间的相互作用。本文将详细介绍细胞共培养的不同方法及其特点，并以Transwell共培养为例，提供详细的实验步骤和注意事项。

定义：将两种或多种细胞直接种植在同一培养皿或培养板中。常用于研究细胞之间的直接接触及其影响，如免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤效应。

优点：可以直接观察细胞间的相互作用。
缺点：可能导致细胞混杂，难以分离后续分析。

定义：使用Transwell系统将不同的细胞分隔在不同的层次中。上层细胞放在多孔膜的Transwell插入物中，下层细胞则在底部培养皿中。广泛用于研究细胞间的分泌因子和信号传导（如肿瘤细胞与成纤维细胞之间的相互作用）。

优点：通过分泌的信号分子进行相互作用，避免了细胞之间的直接接触，方便后续分离和分析。
缺点：无法模拟直接接触的细胞间相互作用。

定义：将细胞种植在三维支架或基质中，使其在三维环境中生长和相互作用。用于更接近体内的细胞微环境，研究细胞在三维空间中的生长、分化和相互作用。

优点：更好地模拟组织中的细胞结构和功能。
缺点：技术复杂，成本较高。

定义：将一种细胞的培养基收集，经过处理后用于另一种细胞的培养，以研究细胞分泌的因子对另一种细胞的影响。

优点：简单，易操作。
缺点：无法模拟直接接触或更复杂的细胞间相互作用。

下面将以Transwell共培养为例，详细阐述肿瘤细胞和成纤维细胞的共培养的具体实验步骤。

细胞类型：选择要共培养的肿瘤细胞和成纤维细胞系NIH 3T3。
Transwell插入物：通常使用孔径为0.4 µm的Transwell插入物，以确保细胞之间只能通过分泌的因子交流，而不会直接接触。（一般的迁移、侵袭实验的孔径为8µm）
培养基：选择合适的培养基，确保两种细胞都能生长。提前更换两种细胞都能生长的培养基。

取细胞汇合度70-80%的成纤维细胞，消化、离心、重悬后计数
将成纤维细胞接种在Transwell的下层板（通常为6孔板或24孔板），为了观察成纤维细胞在肿瘤细胞细胞的共同培养下发生的变化，我们把主要观察的成纤维细胞铺在下室，方便后续的细胞收集。（通过收集下室的细胞，可以直接检测上室细胞的分泌物或信号对下室细胞的影响，比如细胞的增殖、凋亡、分化等变化。有助于研究细胞间的相互作用和影响。）
铺板密度根据细胞增值情况而定。本次实验选择6孔板，每孔铺4×10⁵个NIH 3T3细胞覆盖底部。
培养4小时，等待成纤维细胞贴壁后铺肿瘤细胞。