细胞毒性试验：原理、方法与应用指南

细胞毒性试验：原理、方法与应用指南

细胞毒性试验是评估材料、化合物或医疗器械对细胞存活、增殖及功能影响的重要方法，广泛应用于生物相容性评价和药物安全性筛选。本文系统介绍了细胞毒性试验的核心检测方法、实验设计、关键设备与试剂、常见问题解决方案以及国际标准对比等内容，为相关领域的研究和应用提供了全面的参考指南。

核心检测方法与标准

实验设计与关键步骤

细胞选择与培养

• 常用细胞系：L929小鼠成纤维细胞（ISO推荐）、HepG2（肝毒性）、HaCaT（皮肤毒性）。
• 培养条件：DMEM/RPMI-1640 + 10% FBS，37℃、5% CO₂，传代至对数生长期。

样品处理与暴露

• 直接接触法：材料切割为5×5mm薄片，灭菌后与细胞共培养24~72h（ISO 10993-5）。
• 浸提液法：材料按表面积浸提（0.1g/mL，37℃×24h），浸提液稀释梯度（100%、50%、25%）加入细胞。

MTT法操作流程

1. 细胞接种：96孔板，每孔5×10³细胞，孵育24h贴壁。
2. 样品暴露：加入待测样品（浸提液或化合物），设阴性对照（培养基）、阳性对照（0.1%苯酚）。
3. MTT孵育：暴露24/48h后，每孔加MTT（5mg/mL，10μL），孵育4h。
4. 溶解与检测：吸弃培养基，加DMSO 100μL溶解甲臜，酶标仪测570nm吸光度（参考波长630nm）。
5. 计算细胞存活率：存活率=(A样品−A空白)/(A阴性对照−A空白)×100%

结果判定（ISO 10993-5）

关键设备与试剂

常见问题与解决方案

国际标准对比

应用场景与报告要求

• 医疗器械：植入材料（如钛合金、聚合物）需通过ISO 10993-5测试，提交细胞毒性报告至FDA或CE认证。
• 药物开发：新药筛选时计算IC50值（半数抑制浓度），评估治疗指数（TI）。
• 化妆品安全：欧盟EC 1223/2009要求化妆品原料通过体外细胞毒性测试（如皮肤刺激替代试验）。

检测报告内容：

• 样品信息、试验方法（MTT/LDH等）、细胞系、暴露条件、存活率数据、毒性等级结论、标准符合性声明。

通过系统化试验设计，可精准评估材料的细胞毒性风险。建议结合3D细胞模型（如类器官）和高通量筛选技术提升预测准确性，并严格遵循GLP规范确保数据可靠性。

检测机构资质证书

CMA认证

检验检测机构资质认定证书
证书编号：241520345370
有效期至：2030年4月15日

CNAS认可

实验室认可证书
证书编号：CNAS L22006
有效期至：2030年12月1日

ISO认证

质量管理体系认证证书
证书编号：ISO9001-2024001
有效期至：2027年12月31日