血球计数板的使用方法详解

血球计数板的使用方法详解

血球计数板是一种用于计算较大单细胞微生物数量的精密仪器，在生物学、医学等领域的研究中有着广泛的应用。本文将详细介绍血球计数板的原理、构造以及使用方法，帮助读者更好地掌握这一实验技术。

图1：血球计数板示意图

血球计数板的原理和构造

构造

血球计数板由一块特制的厚玻片制成，玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网。方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室。这一大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其容积为0.1mm3。

在血球计数板上，刻有一些符号和数字，其含义是：

• XB-K-25：计数板的型号和规格，表示此计数板分25个中格
• 0.10mm：盖上盖玻片后计数室的高
• 1/400mm2：计数室面积是1mm2，分400个小格，每小格面积是1/400mm2

中央大方格由25×16=400个小方格组成。一般计数四个角和中央的五个中方格（5×16=80个小方格）的细胞数。

原理

计数一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算，对每个样品计数三次，再取其平均值。具体计算公式如下：

N1=(n1-1+n1-2)/2
N2=(n2-1+n2-2)/2
N3=(n3-1+n3-2)/2
N=(N1+N2+N3)/3

其中，N1、N2、N3分别表示三次计数的平均值，n1-1、n1-2等表示具体计数结果。

用血球计数板对藻细胞进行计数的方法与步骤

1. 检查计数室

• 先用显微镜对计数板的计数室进行镜检是否干净
• 若有污物，则需用清水清洗，吹干，用擦镜纸擦拭干净
• 盖玻片使用前浸在75%的酒精溶液中，使用时用眼科镊取出，放在滤纸上吸水，用擦镜纸擦拭干净

2. 准备样品

• 从试管中吸出培养液进行计数之前，要将试管轻轻震荡几下，这样使单胞藻分布均匀
• 当藻液浓度高时，为了便于计数，可将藻液用消毒海水稀释后进行计数
• 在计数有鞭毛或有运动性的藻类时，可先吸取定量的藻液，滴加鲁哥氏碘液（1000毫升藻类用15毫升的鲁哥氏液固定）进行固定，然后添加消毒海水稀释后计数

3. 添加样品

• 将计数板连同盖玻片一起取下，用细口胶头滴管吸取稀释后的摇匀的单胞藻悬液
• 迅速将吸管尖靠在计数池上盖玻片的边缘，略挤胶头滴管让培养液利用液体的表面张力，自行渗入
• 样品流入的量以充满盖玻片下面的空间为宜，盖玻片下面不能有气泡存在

4. 观察与计数

• 样品添加到计数池后，静置5min，使藻细胞沉降
• 将计数板放在载物台的中央，先在低倍镜下找到计数室所在位置后，再转换高倍镜观察
• 计数时，小心移动载物台，从上到下，由左及右又由右及左依次计数各小格内的细胞数
• 一般可采取“数上线不数下线，数左线不数右线”的原则处理
• 如果一个小方格内单胞藻过多，难以数清，应当对培养液进行稀释以便于单胞藻的计数

5. 计算

• N小格平均每小格内的细胞数=N/(5×16)
• 设每毫升中有x个单胞藻
• x个=N/(5×16)×16×25个1cm3(1mm×1mm×0.1mm÷1000)cm3
• x=N/(5×16)×16×25个×1cm3×1000÷(1mm×1mm×0.1mm)
• x=50000N

通过以上步骤，可以准确地计算出样品中单胞藻的数量，为相关研究提供可靠的数据支持。