科研干货 | 这些细胞冻存液，你都了解吗？

科研干货 | 这些细胞冻存液，你都了解吗？

细胞冻存液是生物医学研究中不可或缺的重要试剂，主要用于在低温或超低温环境下保存细胞，以保持细胞的活性和功能。本文将详细介绍细胞冻存液的组成成分、用途、保护机制、配制方法以及注意事项，并列举多种实验室常用的细胞冻存液配方及其特点。

细胞冻存液是一种关键的保存细胞的溶液，通常含有保护剂如甘油或二甲基亚砜。这些保护剂能够降低溶液的冰点，在细胞冻存和解冻过程中起到保护细胞的作用。在冻存过程中，细胞冻存液帮助细胞脱离生长状态，保留细胞的特性，避免冰晶的形成导致细胞受损。通过缓慢降温和快速解冻的原则，细胞冻存液能够有效地保存细胞，并在需要时进行细胞的复苏和应用于实验研究中。

细胞冻存液是一种专门用于在低温或超低温环境下保存细胞的特殊液体，其主要功能是保护细胞免受冰晶形成和渗透压变化等不利因素的影响，从而保持细胞的活性和功能。以下是关于细胞冻存液的详细介绍：

组成成分

• 二甲基亚砜（DMSO）：DMSO是一种有机溶剂，可以降低细胞膜的渗透压，防止细胞因冰晶形成而破裂。DMSO是细胞冻存液中最常用的成分，其浓度通常在5%到10%之间。
• 胎牛血清（FBS）：FBS含有丰富的蛋白质和生长因子，可以为细胞提供营养和保护。FBS是细胞冻存液中常用的成分，其浓度通常在10%到20%之间。
• 肝素：肝素是一种抗凝剂，可以防止细胞在冻存过程中发生凝集。
• 葡萄糖：葡萄糖可以为细胞提供能量，并帮助细胞在复苏后恢复活力。

用途

• 用于造血干细胞、间充质干细胞等干细胞的储存。
• 用于T淋巴细胞、NK细胞等免疫细胞的存储。
• 用于其他类型哺乳动物细胞的储存。

保护机制

• 防止结冰损伤：水在冷冻时会形成冰晶，这些冰晶可能损伤细胞。细胞冻存液中的保护剂可以减少冰晶的形成，从而保护细胞。
  
• 降低细胞内外的渗透压：保护剂如DMSO可以降低细胞膜的渗透压，减少细胞内水分的外渗，避免细胞过分脱水皱缩。
• 抑制细胞代谢：DMSO还可以抑制细胞代谢，减缓细胞老化。

配制方法

• 将DMSO和FBS加入基础培养液中，各自含量占总体积的一定比例，然后滤膜过滤后分装保存备用。
• 常用的冻存液组成成分可以是20%血清（FBS）、10%DMSO、70%1640培养液；或90%血清（FBS）、10%DMSO。

注意事项

• DMSO不用高压灭菌；基础培养液如DMEM不能高温高压灭菌，可以过滤除菌。
• DMSO要用新的，而且要避光保存。

细胞冻存液的正确使用对于保持细胞的活性和功能至关重要，它在细胞培养、细胞保存以及科研领域中扮演着不可或缺的角色。

实验室常用的细胞冻存液

实验室常用的细胞冻存液包括含有血清和DMSO的配方，以及无血清的细胞冻存液。其中，含有20%血清（FBS）、10% DMSO、70%培养基的配方用于冷冻保存细胞，在解冻时需要去除上清中的DMSO。无血清细胞冻存液的配方较为复杂，可能主要含有人血清白蛋白、DMSO、复方电解质注射液和右旋糖苷，或者含有DMSO、葡萄糖等细胞营养成分，增强细胞存活率和活力，减少污染。

另外，羧化ε-聚-ʟ-赖氨酸（COOH-PLL）组成的多两性电解质细胞冻存液展现出优异的冷冻保护特性，有效保护多种细胞类型在冷冻过程中的活力特征。综合来看，不同种类的细胞冻存液在细胞冻存和保护方面发挥着重要作用，为实验室研究提供了可靠的支持。

• 20%血清（FBS）、10%DMSO、70%培养基：这是一种常用的细胞冻存液配方，适用于多数细胞系，能够保证细胞在冻存过程中有较高的存活率。这种配方通过提供血清中的营养成分和DMSO的保护作用，帮助细胞在冷冻和解冻过程中减少损伤。
• 90%血清（FBS）、10%DMSO：这种配方适用于需要特别保护的细胞系，比如长时间保存或特别珍贵的细胞系。高比例的血清可以提供更多的保护，减少细胞在冻存过程中的损伤。
• 商品化的无血清细胞冻存液：这类冻存液不含血清和动物来源的蛋白，减少病毒、霉菌和支原体等的污染风险，适合无血清培养细胞和蛋白表达细胞。它们通常含有DMSO、葡萄糖等细胞营养成分，适用于各种常见和肿瘤动物细胞株，冻存的细胞可在-80℃长期保存，无需经过程序性降温过程。
• 羧化 ε-聚-ʟ-赖氨酸 （COOH-PLL）组成的多两性电解质细胞冻存液：这是一种新型的冻存液，利用COOH-PLL的多两性电解质特性，为细胞提供保护。这种冻存液的具体应用和效果可能需要进一步的专业文献支持，但在搜索结果中没有找到具体的详细信息。

其他细胞冻存液

• DMSO-培养基冻存液：这种冻存液使用二甲基亚砜（DMSO）和培养基的混合物来冻存细胞。DMSO可以有效地降低细胞冻结过程中的冰晶形成，以保护细胞免受冻结损伤。
• Glycerol-培养基冻存液：使用甘油和培养基的混合物来冻存细胞。甘油可以提供类似DMSO的保护作用，适用于一些对DMSO敏感的细胞系。
• FBS-培养基冻存液：使用胎牛血清（FBS）和培养基的混合物来冻存细胞。FBS提供了营养和保护细胞的因子，对某些细胞系有更好的保护效果。
• 细胞保存液（Cell Preservation Solution）：一些商业化的细胞保存液可以直接用于细胞冻存，其中包括某些特殊的保护剂和缓冲液，可以提供更好的细胞存活率。
• Serum-Free Cryopreservation Solution：无血清的冻存液，可以用于细胞系冻存，并减少由血清成分引起的扰动。
• CELLBANKER2 细胞冻存液：这是一种无血清完全细胞冻存液，通用于各种动物细胞株。特别配方有效提高细胞存活率和活力。不含动物来源性蛋白，能减少各类病毒、霉菌和支原体等污染，确保冻存细胞安全。
• BeyoAOF™无血清细胞冻存液：碧云天生产的这种冻存液不含血清、无蛋白、无须程序降温并能长期-80℃保存细胞的即用型细胞冻存液，适用于绝大部分的哺乳动物细胞冻存。
• CryoStor CS10 临床级即用型细胞冻存液：美国Biolife品牌的产品，预先配制了USP级DMSO，这是一种渗透性冷冻保护剂，有助于减轻冰的形成造成的损害。
• 赛存生物全系列细胞冻存液：包括免疫细胞冻存液、干细胞冻存液、卵母细胞/胚胎冻存液及组织冻存液等。
• Kryoplus™原代细胞冻存液：使用DMSO预配制，为各类细胞系、原代细胞在冻存和复苏过程中提供安全可靠的保护环境。