常见病理染色实验|如何根据自己的研究对象选取合适的病理染色方法

常见病理染色实验|如何根据自己的研究对象选取合适的病理染色方法

引用

丁香园

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病理染色是医学和生物科学研究中不可或缺的技术手段，通过不同的染色方法可以观察组织结构、细胞形态、蛋白质表达等多种信息。本文将介绍10种常见的病理染色方法，帮助研究人员根据研究对象选择合适的染色方案。

（图片来源于网络）

1. HE染色

• 应用：HE染色是最常用的组织学染色方法，可以用于观察组织结构、细胞形态和核染色质等。可用于病理诊断、评估组织损伤程度以及确定肿瘤类型等。
• 结果判断：细胞核呈蓝色或紫色，细胞质和其他组织结构呈粉红色。
• 样本检测：固定的组织切片，如肿瘤组织、器官组织等。
• 优缺点：简单易行，可以提供关于细胞形态学和组织结构的信息。缺点是不能提供特定蛋白质或分子的信息。

2. IHC染色

• 应用：IHC染色用于检测组织中特定蛋白质的表达情况，以确定细胞类型、肿瘤分级、预后评估和治疗靶点等。它可用于检测抗原在组织中的定位、数量和分布。
• 结果判断：阳性结果：可能呈棕色、黄色或红色，取决于使用的酶标记物或荧光标记物；阴性结果：无明显染色。
• 样本检测：组织切片。
• 优缺点：可以提供特定蛋白质的信息，包括表达和定位。然而，该方法依赖于抗体的选择和特异性，且结果可能受到抗体亲和性和交叉反应等因素的影响。

3. 免疫荧光

• 应用：免疫荧光染色也用于检测组织中特定抗原的表达和分布，通过荧光信号的观察来确定其位置和表达水平。主要应用于自身免疫性疾病的诊断、免疫反应的研究以及细胞定位等。
• 结果判断：荧光信号：根据使用的荧光标记物而有所不同。常见的颜色包括绿色（FITC标记物）、红色（Cy3标记物）、蓝色（DAPI染色核酸）等。
• 样本检测：固定的组织切片，肿瘤组织、器官组织等，以检测特定抗原的表达。
• 优缺点：提供蛋白质的表达和细胞定位信息，具有高灵敏度。然而，与ICH相似，抗体的选择和特异性对结果至关重要。

4. Masson染色

• 应用：Masson染色用于观察胶原纤维的分布和形态，常用于研究纤维组织增生、纤维化和肉芽肿等病理过程。
• 结果判断：胶原纤维染蓝色，细胞核和其他组织结构：染不同颜色，如细胞核呈黑色，肌纤维呈红色。
• 样本检测：固定的组织切片或细胞涂片，用于检测特定抗原或分子的表达和定位。
• 优缺点：可以提供关于纤维组织变化的信息。然而，结果可能受到染色剂选择和操作技术的影响。

5. 天狼猩红染色

• 应用：天狼猩红染色主要用于染色骨髓涂片和神经组织切片，主要应用于评估铁过载病理、肝脏疾病等，以观察细胞核、细胞质、髓鞘等结构。
• 结果判断：使用天狼猩红作为染色剂，它可以与铁离子结合形成染色复合物，细胞核呈蓝色，细胞质和髓鞘呈红色或粉红色。
• 样本检测：常用于神经组织或骨髓涂片的染色。
• 优缺点：可以提供关于组织中铁离子沉积的信息，对于诊断铁过载疾病具有重要意义。然而，该方法不能区分不同类型的铁沉积。

6. PAS糖原染色

• 应用：PAS糖原染色用于检测组织或细胞中的糖原含量和分布情况。常用于评估肝脏、肾脏、肌肉等器官的糖原沉积和代谢异常。
• 结果判断：糖原呈紫色或洋红色，细胞核和其他组织结构呈不同颜色，如细胞核呈蓝色。
• 样本检测：适用于检测组织中的糖原含量和分布，如肝脏、胰腺等。
• 优缺点：可以提供关于组织中糖原含量和分布的信息，对于研究糖代谢异常和肝脏疾病等具有重要意义。然而，该方法不能区分不同类型的多糖。

7. TUNEL染色

• 应用：用于检测细胞凋亡（程序性细胞死亡）的发生情况。通过特异性地标记DNA断裂末端，以显示细胞内的凋亡现象。
• 结果判断：阳性结果呈现明显的核染色（通常为深褐色或黑色），反映细胞内DNA断裂的存在。阳性反应表示细胞内存在DNA断裂，即细胞发生了凋亡。观察样本中的细胞核，如果出现明显的深褐色或黑色染色，则表示该细胞发生了凋亡；而未染色或仅染浅色的细胞则被视为阴性。
• 适用样本：固定的组织切片或细胞涂片，可用于检测各种组织和细胞类型中的凋亡现象。
• 优缺点：优点是简单易行，能够定量和定位细胞凋亡事件。缺点是不能提供关于凋亡方式的详细信息，如凋亡的具体机制或类型。

8. 番红固绿染色

• 应用：用于组织学检查和病理诊断，可显示细胞、组织的形态结构、核分裂和病变情况。
• 结果判断：不同细胞和组织结构呈现特定颜色，如细胞核呈蓝色，细胞质和纤维结构呈粉红色或橙红色等。可以根据不同的颜色和形态特征来识别不同类型的细胞、组织结构以及病变情况。例如，细胞核常呈蓝色，而细胞质和纤维结构则呈粉红色或橙红色。
• 适用样本：固定的组织切片，广泛应用于各种器官和病理学研究中。
• 优缺点：优点是提供有关组织结构和细胞类型的详细信息，常用于常规组织学和病理诊断。缺点是对于某些特殊结构或细胞类型的详细描述可能相对较少。

9. β-半乳糖苷酶染色

• 应用：β-半乳糖苷酶染色主要用于检测细胞内β-半乳糖苷酶的活性，常用于研究基因表达、细胞老化和肿瘤转移等过程。
• 结果判断：根据染色后显示出蓝色或绿色沉积物的细胞或组织来判断β-半乳糖苷酶的活性。阳性结果显示蓝色或绿色，而阴性结果则无明显染色。
• 样本检测：固定的细胞或组织样本，常用于研究基因表达、转导实验或体外操纵。
• 优缺点：优点是能够直接观察到β-半乳糖苷酶的活性。缺点是染色结果可能受到非特异性反应的干扰，需要注意控制实验条件。

10. 尼氏染色

• 应用：尼氏(Nissl)染色液(Nissl Staining Solution)是神经生物学家广泛使用的一种Nissl染色液，用于石蜡或冰冻切片神经元细胞浆中的尼氏小体(Nissl body)染色。Nissl染色液染色后呈深蓝色，常用于显示脑或脊髓的基本神经结构。Nissl小体大而数量多，说明神经细胞合成蛋白质的功能较强；相反在神经细胞受到损伤时，Nissl小体的数量会减少甚至消失。
• 结果判断：通常尼氏体能被碱性染料如硫堇、亚甲蓝、甲苯胺蓝和焦油紫等染料染成紫蓝色。
• 样本检测：神经元细胞体包括一个具有皱褶核膜的大细胞核、稀疏的染色质和一个明显的核仁。在细胞体中细胞质是尼氏颗粒，即能够代表粗面内质网并在很多神经元中产生特异的斑点状嗜碱性表现的嗜碱性颗粒。尼氏颗粒可以用很多染色来显示如中性红、亚甲基蓝、甲苯胺蓝和甲基紫等。染色的变异、pH和分化的时间使一些染色既可以仅突出尼氏物质，也可以显示神经元的细胞核和神经胶质。
• 优缺点：各种神经细胞内都含有尼氏体，但其形状、数量、分布位置常常不同。尼氏体也存在于树突中，但不在于轴突和胞体的轴丘。尼氏体会因为生理状态的变化而变化，尼氏体是神经元内蛋白质合成的重要部位，当神经元受到刺激后，胞体内的尼氏体会明显减少。

总结

不同的病理染色实验具有不同的应用和用途，可以提供对组织结构、蛋白质表达、纤维组织、糖原含量等方面的信息。结果判断标准根据染色后的颜色、形态、分布来进行评估。适用样本也因染色方法的不同而有所区别，常见的样本包括固定的组织切片、细胞涂片等。每种染色方法都有其优点和限制，需要根据具体需求选择合适的方法，并注意控制实验条件以获得可靠的结果。