实验解析｜蛋白浓缩超滤管的选择原则和注意事项

实验解析｜蛋白浓缩超滤管的选择原则和注意事项

蛋白浓缩超滤管是生物化学和分子生物学实验中常用的工具，主要用于生物样品的浓缩和纯化。正确选择和使用超滤管对于实验的成功至关重要。本文将详细介绍蛋白浓缩超滤管的选择原则和使用注意事项，帮助研究人员更好地完成相关实验。

可用于浓缩含有抗原、抗体、酶、核酸（DNA/RNA样品，单链或双链）、微生物、柱洗脱液和纯化样品的生物样品，纯化组织培养提取物和细胞裂解物中的大分子成分，从反应混合物中去除引物、接头或分子标记物，并在 HPLC之前去除蛋白质及脱盐、缓冲液置换或洗滤。

蛋白浓缩超滤管的选择原则

在选择蛋白浓缩超滤管时，需要遵循以下原则以确保实验的成功和效率：

1. 明确实验需求

• 目的蛋白分子量：确定需要浓缩或分离的蛋白质的分子量是选择超滤管截留分子量（MWCO）的基础。通常，截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3。例如，若目的蛋白分子量为40 kDa，可以选择10 kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量较小，如10 kDa左右可以选择截留分子量3 kDa的超滤管。

• 样品体积：预估需要处理的样品体积，以便选择合适的超滤管容量。Millipore等厂商提供了多种容量的超滤管，如0.5 ml、4 ml、15 ml等，以适应不同体积的样品，可根据实验目的选择相应容量的超滤管。

2. 材料兼容性

超滤管通常使用再生纤维素膜或其他高性能材料制成，这些材料具有不同的化学耐受性和物理特性。因此，需要根据实验条件选择合适的材料，以确保超滤管在实验中不会与样品发生反应。

3. 离心机兼容性

不同型号的超滤管可能需要不同类型的离心转子，如水平转子或固定角度转子，根据超滤管型号选择合适的转子。

4. 阅读说明书

在选择超滤管后，务必仔细阅读使用说明书。说明书中会详细介绍超滤管的使用方法、注意事项、化学耐受性等信息，对于确保实验成功至关重要。

操作注意事项

在使用蛋白浓缩超滤管进行蛋白浓缩时，需要注意以下事项：

1. 预处理

• 新买来的有些超滤管是干燥的，使用前需要加入Milli-Q水或其他适当的溶液进行预处理，以确保超滤膜被充分润湿。水量应完全过膜，并在冰浴或冰箱里预冷几分钟。

• 有的超滤管中的超滤膜含有甘油，如果甘油会影响到后续的实验，可以在使用前用缓冲液或Milli-Q水冲洗超滤管。如果干扰仍然存在，用0.1 N NaOH 冲洗，然后用缓冲液或 Milli-Q水第二次离心。

2. 加入蛋白液

• 将预处理后的水倒出后，即可加入蛋白液。加入的蛋白液量以不超过管顶的白线（即超滤管最大体积）为准。

• 新超滤管可能存在吸附蛋白的现象。

• 操作时要轻，注意枪头不要刮破滤膜，否则将造成样品流失。

• 加入蛋白液前，超滤管需要插在冰上预冷（实验过程中用到的缓冲液同样需要预冷）。

3. 平衡与离心

• 在进行离心超滤前对超滤管进行配平。

• 严格按照说明书操作要求设置离心机转速，以免损坏超滤膜。

• 离心过程中，一定要等离心机达到目的转速之后方可离开，以便及时处理可能出现的问题。

4. 检查与调整

在离心过程中，需要定期检查超滤管是否漏液或发生蛋白沉淀导致堵管。若发生漏液，应及时将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。若发生蛋白沉淀，需要确定沉淀的具体原因，并采取相应的措施解决。

5. 浓缩与换Buffer

• 当蛋白液浓缩至一定体积时（≤1mL），可以根据需要加入新的Buffer进行换液操作。

• 换液操作应轻柔进行，避免对超滤膜造成损伤。

• 换液后继续离心浓缩至所需体积。

6. 取出浓缩液

• 使用200 μL吸头的移液器回收浓缩物。

• 取出最终蛋白浓缩液的操作应在冰上进行，以避免蛋白受热变性。

• 使用适当的枪头轻轻顺着边缘插入超滤管中，轻轻吹打、混匀蛋白液后吸取浓缩液。

7. 处理与保存

• 使用完毕后，应按照说明书中的步骤对超滤管进行清洗和处理以便重复使用，每根超滤管最多处理一种类型的样品，不建议重复使用，以免对后面的实验产生影响。

• 保持超滤管始终处于湿润的状态。

• 处理完毕后将超滤管保存在适当的条件下以备下次使用，至少应将滤膜完全浸泡在75%乙醇中，于4℃保存，具体可根据实验室要求或说明书操作。