牛病毒性腹泻-粘膜病的实验室诊断技术

牛病毒性腹泻-粘膜病的实验室诊断技术

牛病毒性腹泻-粘膜病是由牛病毒性腹泻病毒感染引起，对牛具有较大的危害，该病的潜伏期7～10d。该病的临床症状比较明显可分急性和慢性两种。（1）急性病症潜伏期一般在1周左右，病牛将出现持续高烧、精神不振等症状。严重时，将会引发腹泻，致使牛体内水分流失，使其体温升高，进而引发牛的死亡。（2）慢性病症病牛的体温长期偏高，临床表现不如急性腹泻剧烈，但同样会对牛造成较大影响。而且，牛的眼角、鼻腔会出现大量的分泌物，导致牛逐渐消瘦，使其失去健康的体征。该病后期，病牛会极度消瘦，黏膜会出现大量的充血，肠道伴有粘液、气泡等，导致牛无法正常采食，使其逐渐衰弱而死亡。所以，需要做好该病的防治工作，避免该病的发生和流行，应结合实验室诊断的方式，使病变能够得到及早预防，降低粘膜病对牛的影响。

实验室诊断技术

免疫过氧化物酶技术

该技术具有较强的可靠性，诊断结果较为准确。采用该技术检测时，需要对BVD-MDV抗原进行检测，对其分布状况进行确定，对抗原，需要采用过氧化物酶进行处理，制作组织切片，抗原将固定在组织中，确保抗原检测精确度。切片需要采用0.02%蛋白酶进行处理，在4℃环境下，对切片进行消化处理，提高切片对酶的亲和度。牛病毒性腹泻—粘膜病属于持续性的病毒血症，对组织的影响较为严重，对病毒抗原应进行严格检测，提高病原检测技术的有效性。对BVD-MDV可以采用间接鉴定形式，通过过氧化物酶对切片的着色检查，借由免疫荧光法进行检验，进而可以通过显微镜进行观察，确保染色后的细胞能够肉眼可见。

蛋白A胶体金免疫电镜技术

电镜检查是病毒诊断的重要方式，能够实现病毒粒子的检测，对病毒粒子进行敏感识别。电镜技术对病毒粒子数量具有一定的要求，需要控制在107个/mL，保证病毒能够通过电镜进行识别。电镜技术需要采用高速离心操作，对病毒液进行浓缩处理，以降低对病毒鉴定的难度。电镜具有较高的检测密度，可以在低倍数的情况下进行检查，使病毒检测便具可靠性，提高对病毒的识别能力。在蛋白A胶体金免疫的作用下，实现对抗原-抗体复合物的识别，使其形成抗体桥的形式，使金颗粒能够分布在抗桥的周围，确保病毒构造的清晰程度。该诊断技术检测过程较为迅速，对病毒的识别较为敏感，在诊断时间方面，仅用3～4h便可完成检验。电镜技术可对病毒的特征进行识别，对病毒囊膜上的纤突进行确定，检测具有较高的敏感性。

核酸杂交技术

核酸杂交技术是较为新颖的诊断技术，并且实验要求较高。核酸杂交可以对病变细胞进行识别，通常采用基因探针识别的方式，对病变细胞的基因序列进行检验。核酸杂交技术具有较强的敏感性，属于基因检测范畴，要重视探针的使用方法，提高探针的应用水平。应用该技术时，需要采用杂交方式进行诊断，通过对杂交率进行分析，对病毒对细胞的感染情况进行判断。基因探针具有较强的针对性，其诊断精度很高，诊断过程中具有较高的检出率。核酸杂交技术的难点在于对探针的制作，需要以病毒核酸作为制作探针的依据，确保探针能够对病源进行精准识别，保证杂家技术应用的合理性。

聚合酶链反应技术

该技术具有较高的敏感性、特异性，操作比较方便，适用于对病变细胞的检测。聚合酶链反应需要对引物进行DNA的序列层面扩增，同时需要在正常细胞中培养，将病变细胞与其进行对比，使病毒的检测更加的标准化。在聚合酶的作用下，可以对病毒进行反转录，提高病毒检测的敏感性。检测过程中，敏感度的临界值为半数组织培养感染量，能缩短诊断时间，提高细胞检测的有效性。聚合酶链反应属于基因层面的检测，一般采用特异性引物，提高DNA序列的转录效率，保障病毒诊断能够顺利进行。

病毒分离鉴定技术

病毒分离鉴定技术是指在血清中分离病毒，并对其进行鉴定，进而诊断疾病的技术，此种技术应用较为成熟，属于病原鉴定的重要技术手段之一。在技术应用的过程中，需要对接种细胞进行培养，同时对细胞的病变情况。在实验过程中，要采集病牛病料并分离病毒，接种到健康细胞中，经过细胞传代，分析病毒感染情况。为了确保病毒的分离效果，需要将病原接种到MDBK细胞中，经过培养和传代可发现细胞病变，经过检定后发现细胞呈现阳性，进而证明病毒为牛病毒性腹泻病毒。病毒分离鉴定诊断是一种间接诊断方式，在外部对接种细胞进行培养，需要消耗一定数量的时间。患病早期病牛没有临床表现，需要采用病原进行外部培养，以提高对病毒的诊断效率。病毒分离鉴定可通过细胞培养提高病原的数量，以提高整顿的精准性。

血清抗体检测技术

血清抗体检测技术，是指采集液