配制培养基的注意事项

配制培养基的注意事项

培养基是细胞培养中不可或缺的重要组成部分，其质量直接影响到细胞的生长和实验结果。本文将详细介绍培养基配制过程中的关键步骤和注意事项，帮助实验室人员掌握正确的配制方法，确保实验的顺利进行。

实验材料

• 基础培养基（液体或干粉）
• PET/PETG方形试剂瓶[NEST]
• 血清（常规为FBS/NBS）
• 补充剂
• 移液枪、电动移液枪
• 15mL、50mL无菌离心管[NEST]
• 灭菌超纯水
• 盒装无菌吸头[NEST]
• 血清移液管[NEST]
• 超净工作台
• 双抗（青链霉素混合液）
• 杯式滤器(0.22μm PES膜) [NEST]
• 针式滤器 (0.22μm PES膜) [NEST]

实验准备

血清准备

配置培养基前一天，将所需血清从-20℃冰库取出，放置入2-8℃冰箱缓慢解冻储存，使用前37℃水浴加热。

培养基准备

液体基础培养基使用前37℃水浴加热。

实验流程

基础培养基配置（干粉）

根据配置体积，选择合适的灭菌后容器，在容器中倒入约90%体积的超纯水，将培养基干粉全部倒入该容器中，用少量超纯水将袋内残留粉末洗出。

搅拌30min使所有成分完全溶解，待溶液澄清后，根据说明书加入适当量的碳酸氢钠（分析纯），继续搅拌5-10min至溶解，随后超纯水定容并调节PH值。(过滤会使培养基PH值稍微偏高，所以用1mol/L氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸溶液调整PH值至7.20-7.30）

使用0.22μm杯式滤器[NEST]或0.22μm针式滤器[NEST]过滤除菌，并按照日常使用规格分装入PET/PETG方形试剂瓶[NEST]中，2-8℃条件下避光保存备用。【菌检合格后方可使用】

培养基配置

若含有补充剂，用1000μL无菌吸头[NEST]取出适量预热完成的基础培养基，注入补充剂西林瓶中，将其充分溶解，再将含有补充剂的培养基转移入基础培养基中。

接着按照血清使用比例，用血清移液管[NEST]吸取适量预热完成的血清，注入基础培养基中，盖上瓶盖充分混匀。

双抗加入

除了特殊筛选系统外，一般正常培养状态下，培养基中不添加任何抗生素。若为防止细菌、真菌污染，或怀疑细胞污染需要清除细菌，可以加入青霉素-链霉素双抗溶液，其培养基中的终浓度为青霉素100U/ml，链霉素为100ug/ml。

培养基保存

将配置后的完全培养基2-8℃条件下，避光保存备用；或按照使用需求分装入对应规格的PET/PETG方形试剂瓶[NEST]中。隔夜或1-2天后观察完全培养基，溶液澄清通透且无染菌，方可使用。

使用多余的血清，按照剩余量，可分装入15mL/50mL的无菌离心管[NEST]中（防止血清冻存后膨胀泄露问题，离心管工作体积建议为80%），亦可分装入合适规格的PET/PETG方形试剂瓶[NEST]中，并用封口膜封口，-20℃条件下避光保存。