ARMS PCR——基因突变检测新技术！

ARMS PCR——基因突变检测新技术！

随着医学研究的不断发展，靶向治疗的越来越成熟，而靶向治疗的前提是对药物的分子靶点进行基因检测，找到导致遗传病或肿瘤发生的基因突变。ARMS-PCR是一项在PCR基础上发展起来的新方法，可检测出DNA中各种点突变，是目前国际上肿瘤个体化分子检测最重要、最广泛应用的技术之一，其在临床应用中的优势已被业内专家广泛认可。

ARMS-PCR即扩增阻滞突变系统PCR(Amplification Refractory Mutation System PCR,ARMS-PCR)，又称为等位基因特异性PCR（Allele-Specific PCR，AS-PCR），通过引物3’末端引物设计控制等位基因特异性延伸，并结合Taqman探针的方法检测荧光信号值，从而判断野生型等位基因和突变型野生基因。

ARMS PCR引物设计时等位基因两条上游引物中3’端核苷酸不同，两条引物分别对野生型和突变型特异。扩增时，与模板不能完全匹配的上游引物将不能完全形成互补碱基对，形成错配，延伸受阻，不能产生PCR产物，而与模板匹配的引物体系则可以扩增出相应的PCR产物，Taqman探针上相应的荧光基团可产生荧光信号被仪器检测到，通过分析荧光数据确认其基因型。

图1：ARMS-PCR基本原理（图源于网络，侵删）

翌圣公司基于扩增阻滞原理开发了一款试剂盒，能够有效进行ARMS-PCR介导的基因分型。该产品具有以下特点：

• 选择性高：可检测多种基因突变
• 灵敏度高：突变型引物可检测低至10ng/ μL DNA中0.05%的突变
• 判读简便：结果直观，客观判读结果，简便易行
• 操作便捷：适用于多种PCR仪器，操作方法标准化，90分钟内完成上机检测

该产品的性能数据如下：

产品阻滞效果好

实验：模板投入量5μL，突变型引物扩增10ng/μL野生型模板和等拷贝数突变型质粒
位点：KRASG13D（38G>A）

图2：野生型引物扩增野生型模板和突变型模板。根据扩增曲线发现野生型模板无起峰或野生型和突变型Ct值差异≧6-8，可成功区分野生型和突变型基因

产品检测率可达0.05%

实验一：自混标准品制备方法（50%）：50μL 10ng/μL野生型DNA+50μL 3×103copies突变型质粒。
位点：KRASG13D(38G>A)

图3：根据扩增曲线发现，产品在0.05%的浓度时仍有较好的表现

实验二：购买的5%的标准品（50ng/μL)用文库稀释液稀释成10ng/μL，进一步用10ng/μL 293gDNA稀释成0.1%和0.05%。
位点：L858R

图4：根据扩增曲线，位点在10ng/μL的野生型gDNA背景下检出率可高达0.05%，并经过商业化标准品进一步验证，说明我司产品检出率良好

产品稳定性好

产品反复冻融10次不影响其扩增以及阻滞效果

实验：红色：-20℃；绿色：真实反复冻融5次；蓝色：真实反复冻融8次；紫色：真实反复冻融10次。
位点：L858R

图5：13755试剂真实反复冻融10次不影响其扩增以及阻滞效果

在37℃，7天条件下不影响其扩增以及阻滞效果

实验：红色：-20℃；绿色&紫色：37℃7天。
位点：L858R

图6：13755试剂37℃，7天不影响其扩增以及阻滞效果