ELISA全攻略：从入门到精通的实战经验分享

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酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）是生物医学领域应用最广泛的技术之一，其高灵敏度、高通量和低成本的特点使其成为蛋白质检测的“金标准”。然而，看似简单的ELISA实验背后却暗藏诸多技术细节，稍有不慎便可能导致假阳性、高背景或重复性差等问题。本文基于笔者十余年的实战经验，结合数百次实验优化案例，系统解析ELISA的核心原理、操作技巧、故障排除策略及前沿进展，助您避开“踩坑”陷阱，快速获得可靠数据。

第一章 ELISA基础与类型选择：明确目标是成功的第一步

1.1 基本原理：抗原-抗体的精准“锁钥配对”

ELISA的核心机制是利用抗原-抗体的特异性结合，通过酶标二抗催化显色反应，将不可见的免疫反应转化为可定量的光信号（OD值）。以经典的夹心法ELISA为例，其流程可概括为：

包被→封闭→样本孵育→检测抗体→酶标二抗→显色→终止→读数