培养基配制与微生物培养技术详解

培养基配制与微生物培养技术详解

培养基是微生物学研究和生物技术领域中不可或缺的重要工具。掌握培养基的配制、灭菌与消毒方法，对于开展相关实验和研究具有重要意义。本文将详细介绍培养基的配制原理、方法和步骤，以及消毒与灭菌的具体操作，帮助读者更好地理解和应用这些知识。

培养基的配制

培养基是人工配制的，适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养基质。其配制需要遵循以下原则：

• 目的确立明确
• 营养成分协调
• 控制pH值和渗透压等条件
• 经济节约

配制方法包括查阅文献、精心设计和试验比较。具体步骤如下：

1. 称量
2. 熔化
3. 调节pH值
4. 过滤
5. 分装
6. 加塞
7. 包扎
8. 灭菌
9. 冷却
10. 无菌检查

培养基的种类主要包括：

• 按成分的不同划分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基
• 按物理状态划分：固体培养基、液体培养基、半固体培养基
• 按用途划分：基础培养基、加富培养基、鉴别培养基、选择培养基

常用培养基配方

• 牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂15～20g，水1000mL，pH 7.0～7.2
• 高氏1号培养基：可溶性淀粉20g，KNO3 1g，NaCl 0.5g，K2HPO4·3H2O 0.5g，MgSO4·7H2O 0.5g，FeSO4·7H2O 0.01g，琼脂15～20g，水1000mL，pH 7.4～7.6
• 查氏合成培养基：NaNO3 3g，K2HPO4 1g，KCl 0.5g，MgSO4·7H2O 0.5g，FeSO4 0.01g，蔗糖 30g，H2O 1000ml，pH自然
• 麦芽汁培养基：干麦芽粉加4倍水，在50-60℃保温糖化3-4小时，调整糖液浓度，煮沸后过滤，调pH为6.0

消毒与灭菌

消毒与灭菌的区别

• 消毒：消灭病原菌和有害微生物的营养体
• 灭菌：杀灭一切微生物的营养体、芽胞和孢子

方法

• 物理方法：加热、过滤、辐射
• 化学方法：使用化学试剂抑制或杀灭微生物

加热法

• 干热法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌
• 湿热法：高压蒸汽灭菌法、常压蒸汽灭菌、煮沸灭菌法、超高温杀菌

过滤除菌

• 原理：介质在有压力时阻隔微生物
• 适用范围：血清、抗生素及糖溶液等
• 设备：蔡氏过滤器、滤膜过滤器

辐射灭菌

• 原理：紫外线波长在200－300nm，以265-266nm杀菌力强
• 应用：无菌室、医院等
• 注意事项：对眼睛和皮肤有刺激作用

化学药品灭菌

• 原理：应用化学制剂破坏细菌代谢机能
• 常用化学杀菌剂：乙醇、醋酸、石碳酸、福尔马林、高锰酸钾、新洁尔灭等

微生物的分离、纯化及培养技术

分离与纯化

从混杂的微生物群体中获得只含某一种或某一株微生物的过程。常用方法包括：

• 单细胞挑取法
• 稀释涂布平板法
• 稀释混合平板法
• 平板划线法

培养技术

• 斜面接种
• 液体培养基接种
• 穿刺接种

将已接种的斜面、半固体和液体培养基放置培养箱中培养，将生长好的菌种用牛皮纸包好，置4℃冰箱中保存。

本文原文来自chem17.com