SFLO全光谱流式应用方案：人外周血T淋巴细胞精细分型（14色方案）

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@小白创作中心

SFLO全光谱流式应用方案：人外周血T淋巴细胞精细分型（14色方案）

引用

来源

https://www.powclin.com/SFLO/19.html

流式细胞术是临床上常用的对外周血中不同群体的T淋巴细胞进行鉴别和计数的技术。本文介绍了一个基于谱康医学SFLO全光谱流式细胞仪的14色人外周血T淋巴细胞精细分型方案，该方案能够直观反映机体的免疫功能和稳态，为临床疾病诊断和预后评估提供重要参考。

人外周血T淋巴细胞

临床上常用流式细胞术对外周血中的不同群体的T淋巴细胞进行鉴别和计数，比如CD3+ T细胞、CD8+ T细胞（CTL）、CD4+ T细胞（Th）、调节性T（Treg）细胞等。使用细胞表面标记物对T细胞亚群的定义不断发展。通过趋化因子受体7（CCR7）和CD45RA，可以将经典的T细胞定义为初始T细胞（Naïve，CCR7+CD45RA+）、中央记忆T细胞（CM，CCR7+CD45RA-）、效应记忆T细胞（EM，CCR7-CD45RA-）和终末分化效应记忆T细胞（TEMRA，CCR7-CD45RA+）。通过趋化因子受体（CXCR3和CCR6），可将Th细胞分为Th1细胞（CXCR3+CCR6-）、Th2细胞（CXCR3-CCR6-）以及Th17细胞（CXCR3-CCR6+）。这些细胞亚群之间相互协调，共同发挥免疫调节作用，维持机体稳态。

图1. T淋巴细胞精细分型[1]

本文开发了一个14色的人外周血样本表面标志物检测方案，利用谱康医学SFLO全光谱流式细胞仪对人外周血样本进行了精细的T细胞分型鉴定，可以直观反映当前机体的免疫功能和稳态，辅助临床疾病诊断及预后。

应用方案

仪器配置

SFLO3全光谱流式细胞仪（三激光）
激光器：405nm、488nm、635nm

Panel设计

人外周血T淋巴细胞精细分型检测方案标志物如下表所示：

逻辑圈门

此panel从FCS/SSC图中圈出免疫细胞门，再利用死活染料圈出活细胞，接下来从SSC/CD45图中圈出淋巴细胞门（CD45+CD3+）。淋巴细胞门可以根据CD3、TCRγ/δ的表达区分出T细胞（T cells）、γ/δ T细胞和非T细胞（Non T）。T细胞进一步通过CD4和CD8标志物的表征，可以有效区分出CD4+ T细胞、CD8+ T细胞。CD4+ T细胞和CD8+ T细胞可进一步根据CD197、CD45RA的表达量不同区分为初始T细胞（Naïve）、中央记忆T细胞（CM）、效应记忆T细胞（EM）和重新表达CD45RA的终末分化效应记忆T细胞（TEMRA）。此外，通过CD25和CD127，可以鉴定出Treg细胞；通过趋化因子受体（CXCR3和CCR6），可将CD4+ T细胞分为Th1细胞（CXCR3+CCR6-）、Th2细胞（CXCR3-CCR6-）以及Th17细胞（CXCR3-CCR6+）。根据CD38和HLA-DR的表达，可以检测各T细胞亚群的活化状态。

图1. 人外周血T淋巴细胞精细分型方案圈门策略

本文开发了基于三激光SFLO全光谱流式细胞仪的人外周血T细胞精细分型检测，在进行多色检测的同时无需考虑通道之间的干扰，实现对细胞群体的精准免疫分型，分析细胞亚群之间的功能联系，为疾病诊断和免疫功能评估提供有力支持。

参考文献