高效液相色谱法测定食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的含量

高效液相色谱法测定食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的含量

食品中的糖含量是食品安全检测的重要指标。本文参考GB 5009.8-2023食品安全国家标准，详细介绍了使用高效液相色谱法测定食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖含量的方法。通过建立标准曲线和重复性测试，该方法具有较高的准确性和可靠性。

摘要
目的：使用高效液相色谱仪搭配示差折光检测器检测食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的含量。
方法：采用示差折光检测器及Nova Atom NH2，4.6x250mm，5μm色谱柱，流动相为70%乙腈；流速为1.0ml/min；柱温为40℃；进样体积为10μl。建立标准曲线，通过外标法计算目标物含量。

前言
糖类是自然界中广泛分布的一类重要的有机化合物。日常食用的蔗糖、粮食中的淀粉、植物体中的纤维素、人体血液中的葡萄糖等均属糖类。糖类在生命活动过程中起着重要的作用，是一切生命体维持生命活动所需能量的主要来源。植物中最重要的糖是淀粉和纤维素，动物细胞中最重要的多糖是糖原。但是摄入糖分过多会引发糖代谢问题，因此对食品中糖含量进行检测是十分必要的。
本文参考《GB 5009.8-2023食品安全国家标准 食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定》进行检测，新标准修改了第一法高效液相色谱法的适用范围，保留了饮料类，新增了糖果样品中5种糖的测定，并将《GB 5009.8-2016》中的谷物类、乳制品、果蔬制品、蜂蜜、糖浆等扩大至粮食及粮食制品、乳及乳制品、果蔬及果熟制品范畴。

关键词：液相色谱；示差折光检测器；食品安全国家标准；果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖。

1 实验方法
1.1 仪器配置

表1 高效液相色谱系统配置清单

1.2 测试条件
色谱柱：Nova Atom NH2，5μm，4.6x250mm
柱温：40℃；
检测器：示差折光检测器
流速：1.0ml/min；
流动相：乙腈/水=70/30（体积比）
进样量：10μL；
示差折光检测器条件：温度45℃。

1.3 仪器及试剂、耗材
试剂：超纯水乙腈(色谱纯)
标准物质：果糖（麦克林）、葡萄糖（damas-beta）、蔗糖（general-reagent）、麦芽糖（麦克林）、乳糖（阿拉丁）
辅助装置：分析天平；
溶剂抽滤装置；
超声波清洗机；
实验材料：滤膜：水相滤膜0.45μm。

1.4 溶液配制
1.4.1 混合标准储备液(20.0 mg/ml)：
分别称取经过90℃士2℃干燥2h的果糖和96℃士2℃干燥2 h的葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖各1g(精确至0.001 g),用水溶解后转移至50 mL,容量瓶中,加入2.5 mL乙腈,用水定容至刻度。置于0℃~4℃密封,保存期3个月。

1.4.2 混合标准工作液：
吸取0.100ml、1.00ml、2.00ml、3.00mL和5.00ml混合标准储备液(20.0mg/ml)于10.0ml,容量瓶中,用水定容至刻度,配得果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖的质量浓度为0.200mg/ml,、2.00mg/ml,4.00mg/ml,6.00mg/ml,和10.0mg/ml,的混合标准工作液,可根据实际样品溶液的浓度适当调整混合标准工作液浓度。临用现配。

1.4.3 样品配制：（糖浆和蜂蜜类试样）
称取混匀后的试样1g~2 g(精确至0.001g)于100ml,容量瓶中,加入约50mL水,涡旋混匀至充分溶解,转移至100ml容量瓶中并用水定容至刻度,混匀,静置。

2 结果与讨论
2.1 空白

2.2 系统适用性
图2 果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖标准品色谱图
表1 果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖标准品色谱参数表

分析：本次分析果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖结果较好，各色谱峰之间分离度＞1.5，满足分离要求。

2.2 标准曲线
根据1.4.2配制标准系列溶液，建立标准曲线方程及线性相关系数，检测结果如下：
图2 果糖标准溶液曲线方程及相关系数
图3 葡萄糖标准溶液曲线方程及相关系数
图4 蔗糖标准溶液曲线方程及相关系数
图5 麦芽糖标准溶液曲线方程及相关系数
图6 乳糖标准溶液曲线方程及相关系数
分析：标准曲线线性范围较好，线性相关系数＞0.999

2.3 重复性
图4 果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖标准品重复性谱图(n=7)
表2 果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖重复性色谱参数表(n=7）

分析：五种糖类标准品连续进样7次，重复性结果较好，果糖保留时间重复性RSD值为0.108%；峰面积重复性RSD值为0.345%；葡萄糖保留时间重复性RSD值为0.153%；峰面积重复性RSD值为1.272%；蔗糖保留时间重复性RSD值为0.215%；峰面积重复性RSD值为0.664%；麦芽糖保留时间重复性RSD值为0.257%；峰面积重复性RSD值为0.976%；乳糖保留时间重复性RSD值为0.221%；峰面积重复性RSD值为1.395%。

2.4 样品
图5 枇杷秋梨膏样品色谱图
表3 枇杷秋梨膏样品色谱参数

分析：枇杷秋梨膏中不含乳糖，其中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量分别为：5.719728mg/mL、6.583038mg/mL、0.120169mg/mL、0.743335mg/mL。

3 结论
使用高效液相色谱仪搭配示差折光检测器进行检测，本次分析果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖结果较好，各色谱峰之间分离度＞1.5，满足分离要求。结果显示：标准曲线线性范围较好，线性相关系数＞0.999；五种糖类标准品连续进样7次，重复性结果较好，保留时间RSD值＜0.3%，峰面积重复性＜1.5%。