细胞培养出现黑胶虫污染如何处理？几种抑菌剂对黑胶虫的去除效果

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细胞培养过程中，黑胶虫污染是一个常见的问题，它会影响细胞生长和实验结果。本文将介绍黑胶虫的本质、污染判断方法、去除方式以及预防措施，帮助研究人员更好地应对这一挑战。

黑胶虫的本质尚未定论，有研究认为其属于变形杆菌 a - 2 亚群，存在于胎牛血清中，可穿过 0.22μm 的滤膜；也有研究称其并非生物，而是一种碳酸钙纳米粒子或硅复合物。此外，培养环境的恶化或操作不当也可能引入黑胶虫

黑胶虫与细胞共生，随细胞传代而传代，与细胞竞争性生长，对细胞生长不利，严重时导致细胞死亡，影响细胞培养及其后续实验进展。

形态观察
在普通倒置显微镜的低倍镜下，黑胶虫通常为黑色点状或碎片状；经透射电镜展示，黑胶虫的形态为杆状，长 1300 - 1600nm，宽 400 - 500nm；在激光共聚焦扫描显微镜的 400 倍镜下，黑色颗粒会在原地进行“布朗运动”。
细胞状态变化
培养液不浑浊，但在显微镜下观察细胞时，细胞周围和培养液中有很多“小黑点”，且随着细胞培养时间的延长“小黑点”逐渐增多，更换培养液或洗涤细胞不能将其去除。同时，“小黑点”污染的细胞，营养消耗快，需要频繁更换培养液，细胞生长缓慢，细胞状态差，空泡化严重，甚至还可能导致细胞形态的改变。

抗生素处理
（1）筛选出的抗生素：研究发现“黑胶虫”对氯霉素（25mg/L）、红霉素（200mg/L）和四环素（2.5mg/L）敏感。
（2）优势：可抑制黑胶虫增殖，降低其对细胞增殖的抑制作用。
（3）局限性：只考虑了单一抗生素的抑菌/杀菌效果，未考虑抗生素的联合应用，不同实验室所污染的黑胶虫可能不同，抗生素的适用性有限。
专业清除剂：诺福黑胶虫清除剂：抑制“黑点”生长，快速有效，经过上百种细胞的测试和长期实验验证，兼具高效和广谱清除细胞污染物的能力，对细胞生长几乎无影响，通常可以在短时间内显著抑制黑胶虫的生长，并在连续处理后将其清除。然而，在使用过程中也需要注意以下几点：

预防大于治理，通过采取有效的预防措施，可以最大程度地降低黑胶虫污染的风险，保证细胞培养的顺利进行和实验结果的准确性。

规范操作环境
（1）保持实验室整体环境清洁，空气经过有效过滤，避免微生物积聚。
（2）确保超净工作台过滤器有效、风速正常，操作前充分消毒，物品摆放合理，保证气流正常流动。
强化操作人员规范
（1）严格遵守无菌操作规范，戴口罩、手套，进行手部消毒，避免将自身携带的微生物带入培养体系。
（2）提高操作技术熟练度，在细胞培养过程中，动作轻柔、准确，减少培养体系暴露在空气中的时间。
严格控制培养用品质量
（1）对培养基和血清进行严格质量控制，选择高质量产品，在生产、储存、运输过程中避免污染，使用前进行彻底消毒。
（2）对培养器材如培养瓶、培养皿、移液管等进行严格的清洗和消毒，避免成为染菌来源。

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