培养基煮沸灭菌的操作要领

培养基煮沸灭菌的操作要领

在生物实验室中，培养基的制备和灭菌是基础且关键的步骤。本文通过系统试验，详细探讨了煮沸灭菌培养基的制备方法和操作要领，旨在帮助实验人员熟练掌握这一技术。

试验背景

有客户反馈，在使用需要煮沸灭菌的培养基时，如果仅将粉末与开水混合并煮沸不到1分钟，经常会出现污染。此外，还有客户对如何判断煮沸状态存在疑问。为了解决这些问题，本文通过系统试验展示煮沸灭菌培养基的制备方法和操作要领。

试验方案

1. 培养基溶解效果试验
   选取VRBA和XLD两种常见培养基，通过调整煮沸温度和次数，测试倒平板后的强度，以评估培养基的溶解效果。

2. 培养基灭菌效果试验
   选取VRBA、XLD和TSA三种培养基，通过调整煮沸次数，观察空培养平板的菌落生长情况，以评估灭菌效果。

试验结果与分析

强度试验

（1）VRBA培养基不同温度煮沸后的平板强度测试

图1 VRBA培养基煮至不同温度制成的平板的强度

（2）不同量培养基煮沸后的平板强度测试

图2-1 不同量的VRBA培养基煮沸不同次数制成的平板强度

图2-2 不同量的XLD培养基煮沸不同次数制成的平板强度

图2 不同量的培养基煮沸不同次数制成的平板强度

灭菌试验

三种培养基在不同煮沸次数下的平板空培养结果如下：

图3-1 VRBA培养基平板培养结果

图3-2 XLD培养基平板培养结果

图3-3 TSA培养基平板培养结果

图3 三种培养基平板空培养的结果

从灭菌彻底性来看，VRBA和XLD培养基煮沸1次即可满足要求，但为了确保万无一失，建议至少煮沸3次。而常规需要高压灭菌的TSA培养基，即使煮沸多次也无法达到理想的灭菌效果。

结论与操作建议

1. 为了保证煮沸灭菌的完全溶解性和彻底灭菌性，至少应该煮沸3次。
2. 不同煮沸次数时，培养基的状态表现为：煮沸1次，泡沫多而密集；煮沸3次泡沫减少，仍布满整个液面；煮沸5次，泡沫更少，中心能看到液体。因此，建议至少煮沸3次。
3. 实际操作中通常煮4-6次，每次煮沸的培养基的量可能会有很大差异，煮沸的指标是以煮沸次数来定的，不是以煮沸时间来判断的，只要次数足够，一定能煮出合格好用的培养基。

有关煮沸操作的其它细节，请参考“干粉培养基煮沸灭菌的操作方法及注意事项”，相关视频可参考“培养基的加热灭菌操作”。