流动相跑空伤色谱柱吗？

流动相跑空伤色谱柱吗？

流动相跑空是实验室操作中常见的问题，如果不及时处理，可能会对实验设备造成损害，也会对色谱柱造成影响，并影响后续实验结果的准确性。本文将从多个方面探讨流动相跑空对色谱柱的影响和具体的处理步骤和建议。

对色谱柱的直接影响

气泡进入色谱柱：当流动相跑空时，泵会吸入空气，这些气泡可能会进入色谱柱。虽然HPLC的泵通常设计成不适合长时间输送气体，但在泵完全停止之前，一些气泡可能会进入柱子。气泡的存在会干扰流动相的流动，导致流速不稳定，进而影响色谱分析的准确性和重复性。

溶剂突然减少或中断：流动相跑空意味着色谱柱内的溶剂突然减少或中断，这会导致样品在柱内的传质过程受到影响。具体来说，样品可能会在柱内滞留时间过长，造成峰形展宽和分辨率降低。此外，样品与固定相的相互作用也会减弱，导致保留时间缩短和灵敏度下降。

柱子内部可能干涸：在极端情况下，如果流动相长时间跑空，色谱柱内部可能会干涸。这会导致柱效显著降低，甚至可能损坏色谱柱。

对色谱柱的间接影响

泵和密封垫的损坏：流动相跑空不仅影响色谱柱，还可能对泵和密封垫造成损坏。因为流动相还充当了活塞和密封垫之间的润滑剂，没有了流动相的润滑作用，密封垫很容易磨损。长时间在缺少流动相的情况下运行泵，还可能导致泵内部的密封圈损坏，进而影响泵的性能和寿命。

系统压力异常：流动相跑空后，系统内的压力可能会发生异常变化。这可能会导致单向阀、泵、柱子和检测器等部件堵塞或损坏。因此，在重新启动系统之前，必须仔细检查并排除这些潜在问题。

处理措施

立即停泵并断开管路

• 停泵：发现流动相跑空后，首先要立即停止泵的运行，以防止进一步的损坏。
• 断开管路：将流动相到脱气机等设备的管路断开，防止空气继续进入系统。

排气和清洗

• 排气：使用注射器或其他工具，将泵及管路中的空气排出。可以打开冲洗阀，以较大的流速（如3-5ml/min）进行排气，确保系统内的气泡被完全清除。
• 清洗泵和管路：换上足量的新流动相，通过泵进行循环清洗，以去除可能残留的杂质和气泡。

检查并更换密封圈

• 检查密封圈：长时间的干磨可能导致泵内部的密封圈磨损。因此，需要检查密封圈的状况，如果发现磨损严重，应及时更换。
• 进行压力和泄露测试：为了确认密封圈的性能，可以进行压力和泄露测试。这有助于及时发现并解决问题，避免进一步的损坏。

冲洗色谱柱

• 正相色谱柱：使用正己烷/异丙醇=90/10 以较低的流速（如0.5ml/min）冲洗色谱柱，再更换为目标流动相稳定系统至基线平稳且确认柱子内无气泡为止。
• 反相色谱柱：使用纯甲醇或纯乙腈以较低的流速（如0.5ml/min）进行冲洗，直至基线稳定且确认柱子内无气泡为止。这一步骤有助于恢复色谱柱的性能并去除可能残留的空气。
• 逐步增加流速：在确认色谱柱无问题后，可以逐步增加流速至正常分析所需的流速，以确保色谱柱的稳定性和分离效果。

设置保护参数

• 设置最低压力：在仪器软件中设置泵运行的最低压力值。当流动相不足导致压力下降时，泵将自动停止工作，以保护仪器不受损坏。
• 监控流动相体积：设置溶剂瓶里流动相的实际体积以及最小允许运行的体积。软件可以根据流速和时间自动计算溶剂瓶内的剩余流动相量，并在到达最小允许运行的体积时自动停止运行。

重新进样实验

• 在完成上述步骤并确认仪器恢复正常后，可以进行重新进样实验。通过比较实验数据的前后变化，评估流动相跑空对实验结果的影响程度。

预防措施

• 定期检查和维护：定期对仪器设备进行检查和维护，确保各部件的正常运行和性能稳定。
• 遵守操作规程：严格遵守操作规程，避免操作失误导致的流动相跑空等问题的发生。

通过以上步骤和措施，可以有效地处理流动相跑空的问题，并恢复仪器的正常运行。同时，采取必要的预防措施可以减少类似问题的发生频率，提高实验数据的准确性和可靠性。