怎么用Nanodrop 测定双链RNA浓度？

怎么用Nanodrop 测定双链RNA浓度？

使用Nanodrop光度计测定双链RNA（dsRNA）的浓度是一个简单的过程，但需要正确的方法和适当的对照。

准备工作

确保样品清洁：确保您的dsRNA样品没有蛋白质或其他污染物，因为这些可能会干扰测量。

使用无RNAase的管和工具：在整个过程中使用无RNAase的管和工具，以避免RNA的降解。

Nanodrop操作步骤

1. 开机并校准Nanodrop：打开Nanodrop光度计，并确保其已经校准并且温度稳定。

2. 设置测量程序：在Nanodrop软件中选择“RNA”模式，因为dsRNA的测量与单链RNA类似。

3. 准备标准品（可选，用于构建标准曲线）：如果您有已知浓度的RNA标准品，可以准备一系列稀释液，用于构建标准曲线，以更准确地确定未知样品的浓度。

4. 测量dsRNA样品：

• 将dsRNA样品稀释（如果必要的话），通常使用无RNAase的水或TE缓冲液。
• 使用无RNAase的枪头，将稀释后的样品直接滴入Nanodrop的测量槽中。
• 关闭测量槽盖子，确保没有气泡。
• 在软件中，选择“Measure”来开始测量。

5. 读取结果：Nanodrop软件会显示吸光度（A）值，特别是260纳米（A260）的吸光度。记录A260的吸光度值，并检查A260/A280和A260/A230的比值，以评估样品的纯度。对于dsRNA，理想的A260/A280比值通常在1.8到2.0之间。A260/A230比值应该大于1.5。

计算浓度

如果您没有使用标准曲线，可以使用以下公式计算dsRNA的浓度：

这里的40是一个常数，代表每微克/毫升单链RNA在260纳米的吸光度。对于双链RNA，这个常数可能略有不同，通常在33-37之间，具体取决于dsRNA的碱基组成和结构。建议使用制造商提供的具体数值或通过标准品确定该值。

重复测量

为了确保准确性，可以对每个样品重复测量几次，并计算平均值。

注意事项

• 确保在测量前将dsRNA样品充分混匀。
• 避免气泡和样品污染，这些都可能影响测量结果。
• 如果样品的A260/A280或A260/A230比值不理想，可能需要进一步纯化样品。
• 使用Nanodrop光度计时，请务必参考设备的操作手册和制造商的建议，以确保获得最准确和可靠的结果。