免疫细胞的关键组成-PBMC

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免疫细胞的关键组成-PBMC

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https://m.biomart.cn/mobile/news/article.htm?catId=16&id=3219024&partId=

外周血单个核细胞（PBMC）是免疫学研究中的重要组成部分，它不仅在基础科学研究中占据重要地位，还在临床治疗中展现出广阔的应用前景。本文将为您详细介绍PBMC的组成、功能及其在医学领域的具体应用。

PBMC（peripheral blood mononuclear cell），即外周血单个核细胞，来源于骨髓中的造血干细胞(HSCs)，主要包括淋巴细胞(T细胞、B细胞和NK细胞)，单核细胞，吞噬细胞，树突状细胞和其他少量细胞类型（如图所示）。

其中淋巴细胞占很大一部分（如图所示）：T细胞占PBMC的60-80%，主要负责细胞免疫。B细胞占PBMC的10-20%，主要负责体液免疫，通过产生抗体抵抗病原体。自然杀伤细胞（NK细胞）占PBMC的5-10%，具有杀伤病毒感染细胞和肿瘤细胞的能力，不需要抗原呈递。PBMC在免疫学研究、传染病研究、细胞治疗和药物开发等领域具有重要的应用价值。同时，人外周血淋巴细胞亚群是目前临床评估免疫功能的重要方法之一，随着疾病的发生发展，免疫微环境也随之发生相应变化，进而引起外周血中各种免疫细胞亚群的改变。

目前PBMC的临床应用

1. LAK免疫疗法

将健康人外周血单核白细胞(PBL)在体外培养，经淋巴因子白介素2 (IL-2)激活后扩增，回输至患者体内从而广谱地杀伤肿瘤细胞（杀伤对NK细胞不敏感的肿瘤细胞）的治疗方法。该疗法对转移性肾细胞癌、黑素瘤、结肠癌等疗效较显著。

2. CIK&CAPRI免疫疗法

淋巴细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）是通过细胞因子IL-2、CD3单抗以及干扰素γ(IFN-γ)共同诱导PBMC而获得。CIK是非主要组织相容性复合体（MHC）限制性的杀伤细胞，在血液系统肿瘤及肝癌、肺癌等实体肿瘤的治疗中有一定的疗效；在CIK的基础上发展而来的淋巴链式激活的免疫细胞(CAPRI)，主要是利用患者自身的PBMC，加入CD3单抗和IL-2激活，并在体外将初始T细胞诱导为杀伤性效应细胞。CAPRI细胞治疗的临床效果优于CIK、LAK等细胞治疗，延长了转移性乳腺癌、非小细胞肺癌等多种肿瘤患者的生存时间。

3. PBMCs宫腔灌注

一个全新的宫腔灌注技术近年受到了国际追捧——PBMCs外周血单个核细胞（PBMCs）宫腔灌注（抽提患者自身的PBMCs后在体外进行培养和刺激，然后在胚胎移植前灌注到患者宫腔内）。该方法应用于IVF（体外受精）治疗中的反复着床失败患者，其研究发现PBMCs灌注可有效提高着床率和妊娠率。

PBMC细胞作为免疫学、传染病、恶性肿瘤、疫苗研发、移植治疗、个性化医学和毒理学等领域最基础的实验原料被广泛使用，因此外周血PBMC分离至关重要。

PBMC的分离原理

目前PBMC主要的分离方法是Ficoll-Hypaque（聚蔗糖－泛影葡胺）密度梯度离心法以及Percoll法，其中Ficoll密度梯度离心法是分离、纯化PBMC最常用的方法。原理是：利用各种血细胞和单个核细胞比重之间的差异将各种血细胞与单个核细胞进行分离（红细胞和多核白细胞的比重超过1.080，单个核细胞的比重为1.070左右，血小板为1.030左右）。

聚蔗糖－泛影葡胺是蔗糖的多聚体，中性，平均分子量40kD，当密度为1.2g/mL，具有高密度、低渗透压、无毒性的特点，故常用作PBMC分离的分离液。分离人外周淋巴细胞以密度为1.077±0.001的分层液最佳，因为人的红细胞、粒细胞比重大，密度分别为1.093和1.092，同时因红细胞遇到Ficoll凝集成串钱状因而离心后沉于管底。单个核细胞1.076～1.090之间，血小板为1.030g/mL～1.035g/mL，血小板则因密度小而悬浮于血浆中，而与分离液密度相当的单个核细胞密集在血浆层和分离液的界面中，呈白膜状，吸取该层细胞洗涤、重悬，就可从外周血中分离到较高纯度的单个核细胞，即PBMC，该方法分离纯度通常可达95％，淋巴细胞约占90％～95％，细胞获得率可达80％以上。