DNS法是如何用于测定样品中还原糖含量的？

DNS法是如何用于测定样品中还原糖含量的？

DNS法是一种用于测定样品中还原糖含量的生化实验技术，通过特定的化学反应和比色分析来量化还原糖。

DNS法的原理

DNS法是利用3,5二硝基水杨酸（DNS试剂）与还原糖在碱性条件下发生氧化还原反应，生成棕红色的3氨基5硝基水杨酸。在碱性条件下，DNS试剂被还原糖还原成3氨基5硝基水杨酸，该产物在540nm波长下有最大吸收，其吸光度与还原糖的含量成正比。

DNS试剂的制备

所需材料

• 6.3克DNS
• 262毫升2mol/L氢氧化钠溶液
• 500毫升含有182克酒石酸钾钠的热水溶液
• 5克重苯酚
• 5克亚硫酸钠

制备步骤

将DNS和氢氧化钠溶液加到酒石酸钾钠溶液中，搅拌溶解后加入苯酚和亚硫酸钠，冷却后加水定容至1000毫升，贮于棕色瓶中备用。

葡萄糖标准曲线的绘制

标准液制备

取葡萄糖标准液（1mg/mL），分别取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL于试管中，用蒸馏水补足至1 mL。

显色反应

向各试管中加入2 mL DNS试剂，沸水浴加热2分钟，流水冷却后用水补足至15 mL刻度。

测定吸光度

在540 nm波长下测定吸光度，以葡萄糖含量为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

样品的测定

样品处理

将样品液适当稀释，使糖浓度为0.11.0 mg/mL。

显色反应

取1.0 mL稀释后的糖液于15 mL刻度试管中，加入2 mL DNS试剂，沸水煮沸2分钟，冷却后用水补足至15 mL刻度。

测定吸光度

在540 nm波长下测定吸光度，从标准曲线查出葡萄糖mg/mL数，求出样品中糖含量。

DNS法的优点

• 准确性高：DNS法具有准确性高、重现性好的特点，特别适用于大批量样品的测定。
• 适用范围广：DNS法适合用在多糖（如纤维素、半纤维素和淀粉等）水解产生的多种还原糖体系中，因其显色的深浅只与糖类游离出还原基团的数量有关，而对还原糖的种类没有选择性。

DNS法测还原糖是一种准确、可靠的方法，通过了解其原理、试剂制备、标准曲线绘制及样品测定步骤，可以更好地掌握这一技术。

本文原文来自aiboce.com